Katı Lipid Nanopartikül Formülasyonları İçindeki Nokodazol’ün Belirlenmesi için Onaylanmış HPLC Metodu

Abstract

Nokadazol (NCD), mikrotübüllerin polimerizasyonuyla etkileşerek hücre içinde etkisini gösteren anti neoplastik bir ajandır. NCD hücre iskeletini etkilediği için hücre biyoloji deneylerinde kontrol grubu olarak kullanılmaktadır. Bu çalışmada, katı lipid nanopartikül içine NCD yüklendi. Ters faz yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) kullanılarak NCD'nın ve SLN içindeki NCD için metot ve validasyon çalışması yapıldı. Tayin ve validasyon çalışmalarında, 4.6 × 150 mm, 5µm C18Thermo kolon ve metanol:su:fosfat çözeltisi(45:42.5:12.5, h/h/h , pH 5.03) olan hareketli faz kullanılarak 0.8 mL/dk akış hızında yapıldı. Çalışmalar 256 nm dalgaboyunda ve kolon sıcaklığı 40oC'ye ayarlanarak yapıldı.İç standart madde (IS) olarak naproksen kullanıldı. Naproksen'in ve NCD'nin alıkonma zamanları sırasıyla 2.2 ve 9.8 dk. olarak belirlendi. Özel çalışma aralığı doğrusallık çalışmalarından belirlendi ve 0.5-100 ppm derişim aralığında tutuldu. Belirme sınırı (LOD) ve tayin sınırı (LOQ) değerleri sırasıyla 0.065 ppm ve 0.196 ppm olarak belirlendi.25oC, 4oC ve 40oC'de saklanan SLN formülasyonlarının NCD % geri kazanım değerleri boş nanopartiküller ile karşılaştırıldı

Nocodazole (NCD) is an anti-neoplastic agent which exerts its effect in cells by interfering with the polymerization of microtubules. As NCD affects the cytoskeleton, it is often used incell biology experiments as a control. In this study, NCD was loaded into Solid Lipid Nanoparticle (SLN) systems. A reverse phase high performance liquid chromatography (HPLC) method was validated and applied forthe determination of NCD in SLN. Determination and validation studies were carried out on a 4.6 × 150 mm, 5µm C18Thermo column using an optimized mobile phase (MP) of methanol:water:phosphate buffer (45:42.5:12.5, v/v/v , pH 5.03) at a flow rate of 0.8 mL/min. Diode array detection was performed at 256 nm and the column temperature was adjusted to 40oC. Naproxen was used as an internal standard (IS). The retention times for naproxen and NCD were 2.2 and 9.8 min, respectively. The specified working range was derived from linearity studies and kept in the concentration range 0.5-100 ppm. Limit of dedection (LOD) and limit of quantitation (LOQ) values were determined to be 0.065 ppm and 0.196 ppm, respectively. NCD recovery % results of the SLN formulations which are stored at 25oC, 4oC and 40oC were investigated and compared to the freshly prepared samples