Karbonik anhidraz I ve II izoenxzimlerinin insan eritrositlerinden saflaştırılması ve vbazı bitki ekstrelerinin bu izoenzimler üzerinde etkilerinin araştırılması

Abstract

Tez kapsamında çok sayıda fenolik bileşik içeren bitkilerin antioksidan özelliklerinin yanı sıra insan karbonik anhidraz I ve II (hCA I ve II) izoenzimleri üzerindeki inhibisyon etkilerinin incelenmesi amaçlanmıştır. Ayrıca bitkilerin içeriğinde LC-MS/MS yöntemiyle tespit edilen etken maddelerin hCA I ve II izoenzimleri ile etkileşimini gösteren moleküler docking çalışmaları yapılmıştır. Bu amaçla, in vitro çalışmalar için insan eritrosit hCA I ve hCA II izoenzimleri Sepharose 4B-L-tirozin-sülfanilamid afinite kromatografisi ile sırasıyla, %59,98 ve %64,86 verimle yaklaşık 226,56 ve 614,67 kat saflaştırılmıştır. İzoenzimlerin spesifik aktiviteleri sırasıyla, 5220 ve 14162 EU/mg protein olarak hesaplanmıştır. SDSpoliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) yapılarak enzimin saflığı kontrol edilmiştir. Sonuçlardan elde edilen %Aktivite - [İnhibitör] grafiklerine bakıldığında, hCA I ve hCA II CO2-hidrataz aktivitesi üzerine Equisetum arvense, Origanum vulgare, Achillea millefolium, Artemisia absinthium ve Hypericum perforatum bitkilerinin su ve etanol ekstrelerinin inhibisyon etkisi olduğu gözlemlenmiştir. Bitki konsantrasyonları μg/mL olarak hesaplanmıştır. IC50 değerlerinin %Aktivite - [İnhibitör] grafiklerinden hCA I ve hCA II için 24,64 ile 86,25 μg/mL aralığında olduğu gözlenmiştir. Bu bitkilerin su ve etanol ekstrelerinin antioksidan aktivitelerini belirlemek için; demir indirgeme, FRAP, CUPRAC, süperoksit anyon radikali giderme, DPPH, ABTS, Bipiridil, DMPD, toplam fenol miktarı ve total antioksidan aktivite metodları kullanıldı. Çalışmada kullanılan bitki ekstrelerinin sitotoksisiteleri Mitokondriyal Aktivite Testi (MTT) ile belirlendi.