Development and Validation of a New HPLC Method for the Determination of Quetiapine and Its Metabolites 7- Hydroxy Quetiapine and Quetiapine Sulfoxide in Rat Plasma

Abstract

Sıçan plazmasında ketiapin ve metabolitleri 7-hidroksi ketiapin ve ketiapin sülfoksit'in tayini için yeni bir yüksek performanslı sıvı kromatografisi yöntemi geliştirilmiş ve valide edilmiştir. Ayrım, C18 kolon (Zorbax Eclipse Plus 4.6 mm x100 mm, 3.5 µm partiküller) üzerinde ve 1 mL/dak akış hızında gradient elüsyon kullanılarak yapılmıştır. Hareketli faz, asetat tamponu (10 mM, pH 5) ve asetonitrilden oluşmaktadır. Analitler DAD dedektör kullanılarak, 225 nm'de saptanmıştır. Tüm analizlerde karbamazepin iç standart olarak kullanılmıştır. Plazma numuneleri, asetonitrille gerçekleştirilen tek basamaklı basit bir protein çöktürme yöntemi sonrasında analiz edilmiştir. Analiz süresi, kolon temizleme basamağını da içerecek şekilde, 15 dakikadır. Yöntem kesinlik, doğruluk, geri kazanım, matriks etkisi ve stabilite parametreleri incelenerek valide edilmiştir. Yöntem ketiapin için 0.065-130 µg/mL aralığında, 7-hidroksi ketiapin için 0.086-171 µg/mL aralığında ve ketiapin sülfoksit için 0.042-83.35 µg/mL aralığında doğrusal bulunmuştur. Tüm validasyon parametreleri kabul edilebilir sınırlar dahilindedir. Bu yöntem, sıçan plazmasındaki analit derişimlerini belirlemek için başarıyla uygulanmıştır.

A new high performance liquid chromatography method was developed and validated for the determination of quetiapine and its metabolites 7-hydroxy quetiapine and quetiapine sulfoxide in rat plasma. Separation was performed on a C18 column (Zorbax Eclipse Plus 4.6 mm x100 mm, 3.5 µm particles) using a gradient elution at a flow rate of 1 mL/min. Mobile phase consisted of acetate buffer (10 mM, pH5) and acetonitrile. Analytes were detected with a DAD detector at 225 nm. Carbamazepine was used as internal standard in all analyses. Plasma samples were analyzed after a simple, one-step protein precipitation with acetonitrile. Separation time was 15 min including clean-up step. The method was validated in terms of precision, accuracy, recoveries, matrix effect and stability. It was found to be linearin the range of 0.065-130 µg/mL for quetiapine, 0.086-171 µg/mL for 7-hydroxy quetiapine and 0.042-83.35 µg/mL for quetiapine sulfoxide. All validation parameters were acceptable. This method was successfully applied to quantify the concentrations of the analytes in rat plasma.